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克伦特罗酶联免疫试剂盒

作者:董小姐  转载自:  发布日期:2017-6-28

克伦特罗酶联免疫试剂盒

 

1    概述

克伦特罗是一种肾上腺受体激动剂即神经兴奋剂。80年代末期发现其对家畜具有促进生长,降低脂肪,提高瘦肉率的功效,曾被作为饲料添加剂使用。然而,90年代初期以来,出现多起克伦特罗中毒事件,并出现了死亡案例,因此被禁止使用。

本试剂盒采用间接竞争酶联免疫一步法,可对尿液,组织,饲料中的克伦特罗进行快速定量检测。

2    原理

样品中的游离的克伦特罗与微孔板上预包被的克伦特罗偶联物竞争结合克伦特罗抗体,抗体再与酶标二抗特异性结合。通过洗涤洗掉未结合的克伦特罗抗体与酶标二抗等复合物,再通过酶的专一性催化底物显色,根据显色的深浅来判断样品中克伦特罗含量。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中克伦特罗的含量。

3    试剂盒组成

3.1克伦特罗酶标板:96孔

3.2 克伦特罗标准品:6瓶(1ml/瓶),分别是:

标准品

浓度ng/ml

0

0.05

0.15

0.45

0.9

1.8

3.3 克伦特罗抗体:1瓶(6ml)

3.4 酶标二抗:1瓶(6ml)

3.5 样本复溶液:1瓶(30ml)

3.6 浓缩洗涤液:1瓶(10×,50ml)

3.7 底物液A:1瓶(6ml)

3.8 底物液B:1瓶(6ml)

3.9 终止液:1瓶(6ml)

3.10 说明书:1份

3.11 质检报告:1份

4    需要而未提供的材料

4.1 酶标仪(检测波长450nm,参考波长630nm)

4.2 微量移液器

4.3 前处理所需试剂及相关仪器

 


5    贮存

5.1 试剂盒贮存于2-8℃,切勿冷冻

5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存

5.3 该产品有效期为12个月

6    注意事项

6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

6.2 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(20-25℃)。

6.3 不要使用过期试剂盒;不同批号试剂盒中的试剂不得混
用;不同标准品、样品所用吸头不能混用。

6.4 避免所有试剂接触皮肤;混合试剂时应避免起泡。

6.5 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,实验前稀释使用。

7    试剂配制

7.1 洗涤工作液:

用去离子水将浓缩洗涤液1:9体积进行稀释

例如:10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水

7.2提取液:

2% Nacl:准确称取2.0±0.01g Nacl于烧杯中,加入100ml去离子水溶解,备用。

0.1M Hcl:取浓盐酸8.33ml加水定容至1000ml,或取1M Hcl稀释十倍既得。

肉类组织提取液:取2% Nacl与0.1M Hcl按4:1混合即可。

8    样品处理程序

8.1 尿样

50µl尿样直接进行检测分析(若尿样浑浊,过滤离心至清亮,用上清液检测)。若尿样内克伦特罗含量过高,超出曲线检测范围,可用样本复溶液适当稀释。(稀释系数1)

8.2 肉类组织、猪肝

方法一:取1.00±0.01g均质物(均质前冲去样本中的血水)于15ml离心管中,肉类组织加入3ml肉类组织取液(见配液);猪肝加入3ml 0.1M Hcl,震荡5min。用5000r/min离心5min;移取1ml上清液至2ml聚苯乙烯离心管中,加入15µl左右 1M氢氧化钠溶液混匀,调pH至7-8;取50µl水相进行分析。(稀释系数4)

方法二:取2.00±0.01g均质物(均质前冲去样本中的血水)于15ml离心管中,加入6ml 甲醇,震荡5min,用5000r/min离心5min ;取1.5ml上层甲醇溶液于玻璃管中,并用50℃氮气流吹干;用0.5ml样本复溶液反复吹打溶解残留物,加入0.5ml正己烷震荡混匀,去除上层;取50µl下层液体用于检测。(稀释系数1)

8.3 饲料

将饲料样品粉碎,称取2.00±0.01g置于50ml试管中,加入2ml 1M HCl,16ml去离子水,振荡混匀;用5000r/min室温离心5min;取200µl上清加入1.5ml离心管中,再加入800µl样品复溶液,振荡混匀;加15µl左右1M氢氧化钠溶液混匀,调PH7-8;取50µl分析。(稀释系数50)

9    酶免分析步骤

9.1实验准备

9.1.1预先进行编号,标记标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线)

9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存

9.2分析步骤

9.2.1在标准品孔中加入50µl各标准品溶液,在各样品孔中加入50µl样品溶液;

9.2.2在所有孔中加入50µl的酶标二抗后再加入50µl的克伦特罗抗体,轻微晃动反应板使之彻底混匀,室温下(20-25℃)温浴40min;

9.2.3甩干孔中液体,用洗涤工作液(250µl/孔)洗涤微孔板4-5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;

9.2.4洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl底物液A,再加 50µl底物液B,轻微晃动使之混匀,或将底物A液与B液按所需量1:1混合后每孔加入100µl;

9.2.5室温下(20-25℃)温浴15min,每孔中加入50µl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

10 结果计算

本试剂盒推荐配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序,请联系公司销售人员或致电公司。

11 试剂盒其他参数

本试剂盒灵敏度为0.05ng/ml

尿样检测下限为0.05ng/ml

饲料检测下限为2.5ng/ml

肉类组织检测下限为0.2ng/ml(方法二:0.05ng/ml)

尿样、组织检测回收率为90±15%

猪肝、饲料检测回收率为80±15%

试剂盒板内变异系数小于8%,板间变异系数小于15%

12 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品,应该用其他方法如HPLC加以确认。



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