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β-激动剂酶联免疫试剂盒[食品安全试剂盒

作者:董万先  转载自:  发布日期:2017-6-28

β-激动剂酶联免疫试剂盒[食品安全试剂盒 > 激动剂检测试剂盒]

 

1    概述

β-激动剂是一种肾上腺受体激动剂即神经兴奋剂。80年代末期发现其对家畜具有促进生长,降低脂肪,提高瘦肉率的功效,曾被作为饲料添加剂使用。然而,90年代初期以来,出现多起β-激动剂中毒事件,并出现了死亡案例,因此被禁止使用。

本试剂盒采用直接竞争酶联免疫一步法,可对尿液,组织,饲料中的β-激动剂进行快速定量检测。

2    原理

样品中的游离β-激动剂与酶标板微孔中固相化的β-激动剂竞争结合酶标记β-激动剂特异性抗体;通过洗涤洗掉未结合的β-激动剂;再通过酶的专一性显色剂显色,根据显色的深浅来判断样品中β-激动剂含量。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中β-激动剂的含量。

3    试剂盒组成

3.1β-激动剂酶标板:96孔

3.2 β-激动剂标准品:6瓶 (1ml/瓶),分别是:

标准品

浓度ng/ml

0

0.025

0.075

0.225

0.675

2.025

3.3 β-激动剂酶结合物:1瓶(6ml)

3.4 样本复溶液:1瓶(1×,30ml)

3.5 浓缩洗涤液:1瓶(10×,50ml)

3.6 底物液A:1瓶(6ml)

3.7 底物液B:1瓶(6ml)

3.8 终止液:1瓶(6ml)

3.9 说明书:1份

3.10 质检报告:1份

 


4    需要而未提供的材料

4.1 酶标仪(检测波长450nm,参考波长630nm)

4.2 微量移液器

4.3 前处理所需试剂及相关仪器

5    贮存

5.1 试剂盒贮存于2-8℃,切勿冷冻

5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存

5.3 该产品有效期为12个月

6    注意事项

6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

6.2 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(20-25℃)。

6.3 不要使用过期试剂盒;不同批号试剂盒中的试剂不得混
用;不同标准品、样品所用吸头不能混用。

6.4 避免所有试剂接触皮肤;混合试剂时应避免起泡。

6.5 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,实验前稀释使用。

7    试剂配制

7.1 洗涤工作液:

用去离子水将浓缩洗涤液1:9体积进行稀释

例如:10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水

7.2提取液:

7.2.1 1M HCL溶液:取浓盐酸8.33ml加水定容至100ml。

7.2.2 猪肉提取液:用去离子水将1M HCL溶液1:49体积进行稀释 (例如:2ml 1M HCL溶液+98ml去离子水)。准确称取4gNaCL固体溶于100ml稀释好的盐酸溶液中,振荡混匀,即得猪肉提取液。

7.2.3 猪肝提取液:用去离子水将1M HCL溶液1:49体积进行稀释 (例如:2ml 1M  HCL溶液+98ml去离子水)。

8    样品处理程序

8.1 尿样

50μl尿样直接进行检测分析(若尿样浑浊,过滤离心至清亮,用上清液检测;尿样内β-激动剂含量高可用样本复溶液稀释)。(稀释系数1)

8.2 肉类组织、猪肝

方法一:准确称取2±0.05g均质物(均质前冲去样本中的血水)于15ml离心管中;入6ml提取液(提取猪肉用配液7.2.2猪肉提取液;提取猪肝用7.2.3猪肝提取液),振荡混匀;在室温5000r/min离心5min;取1ml上清液至2ml聚苯乙烯离心管中,加入15µl左右 1M氢氧化钠溶液混匀,调pH至7-8;取50µl用于分析。(稀释倍数4)

方法二:准确称取2±0.05g均质物(均质前冲去样本中的血水)于15ml离心管中;加入6ml甲醇溶液,振荡混匀;在室温5000r/min离心5min;取1.5ml上清液于玻璃管中,并用50℃氮气流吹干;加0.5ml正己烷,再加入0.5ml样本复溶液,反复吹打溶解残留物;将液体移入到1ml的离心管中,去除上层有机层,取下层澄清液体50µl用于分析。(稀释倍数1)

8.3 饲料

用研钵研碎饲料,称2g±0.05g研碎的饲料样品加入2ml 1M HCL溶液,再加入 16ml去离子水,加入0.8gNaCL,振荡混匀;用5000r/min室温离心5min;取200µl上清液加入1.5ml离心管中,再加入800µl样本复溶液,振荡混匀;加入15µl左右 1M氢氧化钠溶液混匀,调pH至7-8;取50µl用于分析。(稀释倍数50)

9    酶免分析步骤

9.1实验准备

9.1.1预先进行编号,标记标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线);

9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存。

9.2分析步骤

9.2.1在标准品孔中加入50µl各标准品溶液,在各样品孔中加入50µl样品溶液;

9.2.2在所有孔中加入50µl的β-激动剂酶标记物溶液,轻微晃动反应板使之彻底混匀,室温下(20-25℃)温浴40min;

9.2.3甩干孔中液体,用洗涤工作液(250µl/孔)洗涤微孔板4-5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;

9.2.4洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl底物液A,再加 50µl底物液B,轻微晃动使之混匀;

9.2.5室温下(20-25℃)温浴15min,每孔中加入50µl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

10 结果计算

本试剂盒推荐配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序,请联系公司销售人员或致电公司。

11 特异性

克伦特罗……100%    沙丁胺醇……175% 妥布特罗……56%         特布他林……44%     马布特罗……42%   西马特罗………<2%

溴布特罗……64%     氯丙那林……8%    莱克多巴胺……<2%

11 试剂盒其他参数

本试剂盒灵敏度为0.025ng/ml

尿样检测下限为0.025ng/ml、饲料检测下限为1.25ng/ml

肉类组织检测下限为0.1ng/ml

尿液、猪肉样本回收率为90±15%

猪肝、饲料样本回收率为80±15%

试剂盒板内变异系数小于8%,板间变异系数小于15%

12 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品,建议用其他方法如HPLC加以确认。



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