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微生物限度检查中平皿法与薄膜过滤法的区别?无菌检查和微生物限度检查比较

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时间:2021-10-25 09:55:16

微生物平皿法和薄膜过滤法与微生物限度检查和无菌检查的介绍


无菌检查是检查是否有活微生物存在的一种方法;,微生物限度检查是检查活微生物数是否超出规定限度的一种方法。由此可见两者是有区别的。无菌检查控制较严格,不允许论何活微生物存在;微生物限度检查只要求活微生物数控制在一定限度范围之内,即可。


在药品控制上,《中国药典》2010年版规定:


无菌检查用于注射剂、滴眼剂等药物的检查,并且检查培养时间为14天。微生物限度检查用于片剂、口服液等制剂的检查,细菌培养3天。霉菌、酵母菌培养5天。口服给药制剂细菌数不得过100cfu/mL,或1000cfu/g;霉菌和酵母菌数不得过100cfu/m L(或)g。


相同之处,无菌检查、微生物限度检查匀应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌室内进行操作。


无菌检查是说任何菌都不能存在,微生物限度检查是说可以有非病原菌的存在但有数量的限制。


集菌仪与无菌检查薄膜过滤器的区别


集菌仪的作用是检验供试品是否含菌的仪器,配套集菌培养器使用。主要用于注射用无菌制剂的无菌检测,包括抗生素类及含有抑菌成份的药品、大输液、水针剂、灭菌医疗器具、无菌注射用水等。其检测过程是,供试品通过进样管道连续被注入集菌培养器中,利用集菌培养器内形成的下压,通过0.45微米孔径的滤膜过滤,供试品 中可能存在的微生物被截留收集在滤膜上,通过冲洗滤膜除去供试品的抑菌成分。然后把所需培养基通过进样管道直接注入集菌培养器中,放置规定的温度培养,观察是否有长菌现象。广泛适用于注射用无菌制剂的无菌检测,包括抗生素类及含有抑菌成份的药品、大输液、水针剂、灭菌医疗器具、无菌注射用水等,也可用于食 品、饮料行业等微生物限度检查。不同于集菌仪的用途是,无菌检查薄膜过滤器,不仅符合中国药典2015版,也是国家药品GMP认证的仪器。其是用于微生物限度检查的。中西药制剂均适用。



《中国药典》微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。


微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。


供试品检查时,如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂,应证明其有效性及对微生物无毒性。


除另有规定外,本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃~35℃;霉菌、酵母菌培养温度为23℃~28℃。


检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 为单位报告,特殊品种可以z小包装单位报告。


 

验证试验也可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。


供试品检查


计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时,按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。


按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1:10、1:l0²、l:10³等稀释级的供试液。


平皿法


根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml,置直径90mm的无菌平皿中,注人15~20ml温度不超过45 ℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。


阴性对照试验


取试验用的稀释液1ml,置无菌平皿中.注入培养基,凝固,倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板,均不得有菌生长。


培养和计数


除另有规定外,细菌培养3天,霉菌、酵母菌培养5天,逐日观察菌落生长情况,点计菌落数,必要时,可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后,计算各稀释级供试液的平均菌落数,按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15.则两个平板的菌落数不能相差l倍或以上。


一般营养琼脂培养基用于细菌计数;玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数;酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下.若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌,则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数,与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较,以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。


含蜂蜜、王浆的液体制剂,用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数,用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数,合并计数。


菌数报告规则


细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级,作为菌数报告(取两位有效数字)的依据。以z高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、lml或10cm²供试品中所含的菌数。


如各稀释级的平板均无菌落生长,或仅z低稀释级的平板有菌落生长,但平均菌落数小于1时,以<1乘以z低稀释倍数的值报告菌数。


薄膜过滤法


采用薄膜过滤法,滤膜孔径应不大于0.45μm,直径一般为50mm,若采用其他直径的滤膜.冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品,其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的z大过滤效率,应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml., 以避免滤膜上的微生物受损伤。


取相当于每张滤膜含lg、lml或10cm²供试品的供试液,加至适量的稀释剂中,混匀,过滤。若供试品每1g、lml或10cm²所含的菌数较多时,可取适宜稀释级的供试液lml进行试验。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜,冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。冲洗后取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。


阴性对照试验


取试验用的稀释液lml,照上述薄膜过滤法操作,作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。


培养和计数


培养条件和计数方法同平皿法,每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。


菌数报告规则


以相当于1g、lml或10cm²供试品的菌落数报告菌数;若滤膜上无菌落生长,以<1报告菌数(每张滤膜过滤1g、lml或10cm²供试品),或<l乘以稀释倍数的值报告菌数。